Kloning molekuler mengacu pada proses dimana molekul DNA rekombinan yang diproduksi berubah menjadi organisme inang, yang kemudian mereka akan direplikasi. Reaksi kloning molekuler biasanya terdiri dari dua komponen berikut :
1. Fragmen DNA yang target untuk direplikasi.
2. Sebuah backbone vektor / plasmid yang berisi semua komponen untuk replikasi di inangnnya
DNA yang target, seperti gen, elemen regulasi( s ) , atau operon, dll, dipersiapkan untuk kloning dipotong dan dikeluarkan dari DNA sumber menggunakan enzim restriksi , serta penyalinan menggunakan Polymerase Chain Reaction ( PCR ), atau perakitan dari oligonukleotida individu. Pada saat yang sama, vektor plasmid disiapkan dalam bentuk linear menggunakan enzim restriksi atau PCR. Plasmid yang berukuran kecil berbentuk melingkar merupakan DNA yang direplikasi dalam inang, dan terdapat secara terpisah dari kromosom inangnya atau DNA genom. DNA target bergabung dengan vektor plasmid melalui ikatan fosfodiester, yang kemudian DNA target menjadi bagian dari plasmid rekombinan baru dan direplikasi oleh inang tersebut .
Vektor plasmid memungkinkan DNA target untuk disalin dalam jumlah besar dan , sering, memberikan elemen kontrol yang diperlukan yang akan digunakan untuk transkripsi langsung dan terjemahan dari DNA kloning . Dengan demikian, mereka telah menjadi bagian yang penting dari banyak metode molekuler, seperti ekspresi protein, studi ekspresi gen, dan analisis fungsional dari biomolekul.
Selama proses kloning, ujung-ujung DNA target dan vektor harus dimodifikasi untuk membuat mereka kompatibel untuk bergabung yang dibantu oleh DNA ligase, rekombinase, atau in vivo mekanisme perbaikan DNA . Langkah-langkah ini biasanya memanfaatkan enzim, seperti nucleases, fosfatase, kinase atau ligase. Banyak metodologi kloning yang baru-baru ini, telah dikembangkan untuk menyederhanakan dalam standarisasi proses ini .
This is a short description in the author block about the author. You edit it by entering text in the "Biographical Info" field in the user admin panel.
0 komentar:
Post a Comment